無塵室棚沉降菌測試規(guī)范安全操作規(guī)程

1、菌落：細(xì)菌檢查后，由一個或好多個細(xì)菌繁殖而產(chǎn)生的一病菌集落，通稱CFU。通常用數(shù)量表明。

2、測試方式：地基沉降法，即利用當(dāng)然地基沉降基本原理搜集在空氣中的微生物物體于培養(yǎng)基培養(yǎng)皿，經(jīng)48個小時以上塑造，在適合的標(biāo)準(zhǔn)下讓其繁衍到可以看到的菌落數(shù)，來鑒定清潔自然環(huán)境內(nèi)的活微生物菌種數(shù)，并借此來鑒定無塵室棚的潔凈度等級。

3、常用的儀器設(shè)備和機器設(shè)備

1）髙壓消毒鍋：應(yīng)用時參考文檔GZ-ZL-SOP-066-00開展實際操作。

2）恒溫培養(yǎng)箱：務(wù)必按時對培養(yǎng)箱的溫度表開展計量檢定。

3）培養(yǎng)皿：一般選用中90mm×15mm硼氯化鎂夾層玻璃培養(yǎng)皿。應(yīng)用前將培養(yǎng)皿放置121℃濕熱滅菌20分鐘。

4、培養(yǎng)基：一般營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加溫融化，制冷至約45℃在無菌技術(shù)前提下將培養(yǎng)基引入培養(yǎng)皿，每皿約15m1。待瓊脂培養(yǎng)基凝結(jié)后，將培養(yǎng)基培養(yǎng)皿放進30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中塑造數(shù)鐘頭，若培養(yǎng)基培養(yǎng)皿上確實沒有菌落生長發(fā)育，就可以供取樣用，制取好的培養(yǎng)基培養(yǎng)皿應(yīng)在2～8℃的條件中儲放。

5、測試流程

1）取樣方式：將已制取好的培養(yǎng)皿置放在預(yù)先確定的抽樣點，開啟培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表層曝露0.5鐘頭，再將培養(yǎng)皿蓋緊蓋后顛倒。
2）塑造，時間不少于48鐘頭。每次培養(yǎng)基應(yīng)該有對比實驗，查驗培養(yǎng)基自身是不是環(huán)境污染，可每次選中3只培養(yǎng)皿作對比塑造。

3）菌落記數(shù)：用人眼立即記數(shù)，隨后用5～10倍高倍放大鏡查驗，有無忽略。若培養(yǎng)皿上面有2個或2個以上菌落重合，可辨別時仍以2個或2個以上的菌落記數(shù)。

6、常見問題

1）測試用品要做殺菌解決，以保證測試的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性。

2）采用一切對策避免 人為因素對樣版的環(huán)境污染。

3）對培養(yǎng)基、塑造標(biāo)準(zhǔn)以及他主要參數(shù)作詳盡的紀(jì)錄。

4）因為病菌品種繁多，區(qū)別甚大，記數(shù)時一般用電子散射光于培養(yǎng)皿反面或正臉認(rèn)真觀察，不必漏計培養(yǎng)皿邊沿生長發(fā)育的菌落，并須留意病菌菌落與培養(yǎng)基沉淀的棚別，必需時要高倍顯微鏡辨別。

5）取樣前要認(rèn)真仔細(xì)每一個培養(yǎng)皿的品質(zhì)，如發(fā)覺質(zhì)變、損壞或環(huán)境污染的應(yīng)去除。

7、測試標(biāo)準(zhǔn)

1）測試情況

（1）沉降菌測試前：被測試無塵室棚（棚）的溫濕度記錄須做到要求的規(guī)定，負(fù)壓差、務(wù)必操縱在標(biāo)準(zhǔn)值內(nèi)。被測試無塵室棚（棚）已消毒。

（2）測試情況有靜止和信息二種，并在匯報中標(biāo)明測試情況。

（3）測試工作人員：測試人員務(wù)必配戴合乎自然環(huán)境潔凈度等級等級的工作服裝。靜態(tài)數(shù)據(jù)測試時，棚里測試工作人員不可超過2本人。

2）測試時間

（1）對單邊流，如100級凈化處理棚間內(nèi)及層.流操作臺，測試應(yīng)在空調(diào)凈化系統(tǒng)軟件正常的運作不少于10分鐘后逐漸。

（2）對非單方面流，如10000級、100000級以上的凈化處理棚間，測試應(yīng)在空調(diào)凈化系統(tǒng)軟件正常的運作不少于30分鐘逐漸。

8沉降菌記數(shù)
1）至少取樣點數(shù)量：可按表1明確。在達到至少測等級的與此同時，還宜達到至少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。  表1最少取樣點數(shù)量

總面積(m2)	潔凈度等級等級
	100	10000	100000	300000
＜10	2～3	2	2	2
≥10～＜20	4	2	2	2
≥20～＜40	8	2	2	2
≥40～＜100	16	4	2	2
≥100～＜200	40	10	3	3

注：表格中的總面積針對單邊流無塵室棚就是指排風(fēng)總面積，針對非單方面流無塵室棚就是指棚間總面積。         表2至少培養(yǎng)皿數(shù)

潔凈度等級等級	所需Φ90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以地基沉降0.5鐘頭計）
100	14
10000	2
100000	2
300000	2

2）取樣點的布局：工作中棚測試點部位距地0.8～1.5m上下（稍高于工作臺面）。可在主要設(shè)備或重要工作中主題活動范疇處提升測量點，取樣點的安排應(yīng)務(wù)求勻稱，防止取樣點在某 部分棚域過度集中化，某部分棚域過度稀少。

3）紀(jì)錄：測試匯報中應(yīng)紀(jì)錄棚間溫度、空氣濕度、壓力差、測試情況及測試數(shù)據(jù)信息。

4）結(jié)果測算：用記數(shù)方式得到每個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。均值菌落數(shù)的測算見上式：m1 m2 …… mn

均值菌落數(shù)m=n

式中：m為平均菌落數(shù)；m1為1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；m2為2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn為n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n為培養(yǎng)皿數(shù)量。

5）結(jié)果鑒定：用均值菌落數(shù)分辨無塵室棚的空氣中的微生物菌種。

6）無塵室棚（棚）內(nèi)的均值菌落數(shù)務(wù)必小于所選中的標(biāo)準(zhǔn)（見表3）。                    表3

清潔等級	100級	10000級	100000級	300000級
規(guī)范（均值）	1個/皿	3個/皿	10個/皿	15個/皿

7）若某無塵室棚（棚）的均值菌落數(shù)超出標(biāo)準(zhǔn)，則務(wù)必對于此事棚域優(yōu)先消毒殺菌，隨后再次測試2次，測試結(jié)果務(wù)必達標(biāo)。

關(guān)鍵論文參考文獻：國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16294-1996