藥廠凈化棚沉降菌測試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

 

1、菌體：細(xì)菌檢查后，由一個或好多個細(xì)菌繁殖而產(chǎn)生的一病菌集落，通稱CFU。通常用數(shù)量表明。

2、測試標(biāo)準(zhǔn)：地基沉降法，即利用當(dāng)然地基沉降基本原理搜集在空氣中的微生物物體于培養(yǎng)液培養(yǎng)皿，經(jīng)48個小時以上塑造，在適合的標(biāo)準(zhǔn)下讓其繁衍到可以看到的菌體數(shù)，來鑒定清潔自然環(huán)境內(nèi)的活微生物菌種數(shù)，并借此來鑒定凈化棚的潔凈度等級。

3、常用的儀器設(shè)備和機(jī)器設(shè)備

1）髙壓消毒鍋：應(yīng)用時參考文檔GZ-ZL-SOP-066-00開展實(shí)際操作。

2）恒溫培養(yǎng)箱：務(wù)必按時對培養(yǎng)箱的溫度表開展計量檢定。

3）細(xì)胞培養(yǎng)皿：一般選用中90mm×15mm硼氯化鎂夾層玻璃細(xì)胞培養(yǎng)皿。應(yīng)用前將細(xì)胞培養(yǎng)皿放置121℃濕熱滅菌20分鐘。

4、培養(yǎng)液：一般營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液。將培養(yǎng)基加溫融化，制冷至約45℃在無菌技術(shù)前提下將培養(yǎng)液引入細(xì)胞培養(yǎng)皿，每皿約15m1。待瓊脂培養(yǎng)液凝結(jié)后，將培養(yǎng)液培養(yǎng)皿放進(jìn)30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中塑造數(shù)鐘頭，若培養(yǎng)液培養(yǎng)皿上確實(shí)沒有菌體生長發(fā)育，就可以供取樣用，制取好的培養(yǎng)液培養(yǎng)皿應(yīng)在2～8℃的條件中儲放。

5、測試流程

1）取樣方式：將已制取好的細(xì)胞培養(yǎng)皿置放在預(yù)先確定的抽樣點(diǎn)，開啟細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)液表層曝露0.5鐘頭，再將細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋緊蓋后顛倒。
2）塑造，時間不少于48鐘頭。每次培養(yǎng)液應(yīng)該有對比實(shí)驗(yàn)，查驗(yàn)培養(yǎng)液自身是不是環(huán)境污染，可每次選中3只細(xì)胞培養(yǎng)皿作對比塑造。

3）菌落計數(shù)：用人眼立即記數(shù)，隨后用5～10倍高倍放大鏡查驗(yàn)，有無忽略。若細(xì)胞培養(yǎng)皿上面有2個或2個以上菌體重合，可辨別時仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。

6、常見問題

1）檢測用品要做殺菌解決，以保證檢測的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性。

2）采用一切對策避免 人為因素對樣版的環(huán)境污染。

3）對培養(yǎng)液、塑造標(biāo)準(zhǔn)以及他主要參數(shù)作詳盡的紀(jì)錄。

4）因?yàn)椴【贩N繁多，區(qū)別甚大，記數(shù)時一般用電子散射光于細(xì)胞培養(yǎng)皿反面或正臉認(rèn)真觀察，不必漏計細(xì)胞培養(yǎng)皿邊沿生長發(fā)育的菌體，并須留意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)液沉淀的棚別，必需時要高倍顯微鏡辨別。

5）取樣前要認(rèn)真仔細(xì)每一個細(xì)胞培養(yǎng)皿的品質(zhì)，如發(fā)覺質(zhì)變、損壞或環(huán)境污染的應(yīng)去除。

7、檢測標(biāo)準(zhǔn)

1）測試狀態(tài)

（1）沉降菌檢測前：被測試凈化棚（棚）的溫濕度記錄須做到要求的規(guī)定，負(fù)壓差、務(wù)必操縱在標(biāo)準(zhǔn)值內(nèi)。被檢測凈化棚（棚）已消毒。

（2）測試狀態(tài)有靜止和信息二種，并在匯報中標(biāo)明測試狀態(tài)。

（3）測試工程師：測試人員務(wù)必配戴合乎自然環(huán)境潔凈度等級等級的工作服裝。靜態(tài)數(shù)據(jù)檢測時，棚里測試工程師不可超過2本人。

2）檢測時間

（1）對單邊流，如100級凈化棚間內(nèi)及層.流操作臺，檢測應(yīng)在凈化空調(diào)機(jī)組正常的運(yùn)作不少于10分鐘后逐漸。

（2）對非單方面流，如10000級、100000級以上的凈化棚間，檢測應(yīng)在凈化空調(diào)機(jī)組正常的運(yùn)作不少于30分鐘逐漸。

8、沉降菌記數(shù)
1）至少取樣點(diǎn)數(shù)量：可按表1明確。在達(dá)到至少測等級的與此同時，還宜達(dá)到至少細(xì)胞培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。

表1至少取樣點(diǎn)數(shù)量

總面積(m2)	潔凈度等級等級
	100	10000	100000	300000
＜10	2～3	2	2	2
≥10～＜20	4	2	2	2
≥20～＜40	8	2	2	2
≥40～＜100	16	4	2	2
≥100～＜200	40	10	3	3

注：表格中的總面積針對單邊流凈化棚就是指排風(fēng)總面積，針對非單方面流凈化棚就是指棚間總面積。

表2至少細(xì)胞培養(yǎng)皿數(shù)

潔凈度等級等級	所需Φ90mm細(xì)胞培養(yǎng)皿數(shù)（以地基沉降0.5鐘頭計）
100	14
10000	2
100000	2
300000	2

2）取樣點(diǎn)的布局：工作中棚測試用例部位距地0.8～1.5m上下（稍高于工作臺面）?？稍谥饕O(shè)備或重要工作中主題活動范疇處提升測量點(diǎn)，取樣點(diǎn)的安排應(yīng)務(wù)求勻稱，防止取樣點(diǎn)在某 部分棚域過度集中化，某部分棚域過度稀少。

3）紀(jì)錄：檢測報告中應(yīng)紀(jì)錄棚間溫度、空氣濕度、壓力差、測試狀態(tài)及數(shù)據(jù)測試。

4）結(jié)果測算：用記數(shù)方式得到每個細(xì)胞培養(yǎng)皿的菌體數(shù)。

均值菌體數(shù)的測算見上式：m1 m2 …… mn

均值菌體數(shù)m=n

式中：m為均值菌體數(shù)；m1為1號細(xì)胞培養(yǎng)皿菌體數(shù)；m2為2號細(xì)胞培養(yǎng)皿菌體數(shù)；mn為n號細(xì)胞培養(yǎng)皿菌體數(shù)；n為細(xì)胞培養(yǎng)皿數(shù)量。

5）結(jié)果鑒定：用均值菌體數(shù)分辨凈化棚的空氣中的微生物菌種。

6）凈化棚（棚）內(nèi)的均值菌體數(shù)務(wù)必小于所選中的標(biāo)準(zhǔn)（見表3）。

表3

清潔等級	100級	10000級	100000級	300000級
規(guī)范（均值）	1個/皿	3個/皿	10個/皿	15個/皿

7）若某凈化棚（棚）的平均菌體數(shù)超出標(biāo)準(zhǔn)，則務(wù)必對于此事棚域優(yōu)先消毒殺菌，隨后再次檢測2次，檢測結(jié)果務(wù)必達(dá)標(biāo)。

 

關(guān)鍵論文參考文獻(xiàn)：國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16294-1996

 

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